Аминокислоты, пептиды и белки - Дэвени Т., Гергей Я. 1976

Анализ концевых групп и ступенчатая деградация белков и пептидов
Определение N-концевых групп 2,4-динитрофторбензольным методом
Непрямая идентификация ДНФ-аминокислот

ДНФ-аминокислоты разрушают в реакции аммонолиза и полученные свободные аминокислоты идентифицируют хроматографией на бумаге [12].

МЕТОДИКА

Фракцию, содержащую ДНФ-производное в метаноле или этилацетате, высушивают, суспендируют в небольшом объеме воды и опять высушивают для удаления следов органического растворителя. Затем остаток растворяют примерно в 50-кратном избытке концентрированного раствора аммиака и переносят в толстостенную ампулу, которую запаивают и выдерживают при 105°С в течение 4—8 ч. Содержимое пробирки высушивают в вакуумном эксикаторе над Р₂О₅ и КОН, растворяют в нескольких каплях воды и хроматографируют на бумаге Шляйхер-Шуль 2043 b в бутанольной системе в направлении сверху вниз.

ПРИМЕЧАНИЯ

1. В бутанольной системе большинство окрашенных в желтый цвет продуктов деградации, образуемых при аммонолизе, мигрируют с фронтом растворителя, и поэтому необходимо, чтобы растворитель дошел до конца листа.

2. ДНФ-производные аминокислот, содержащих серу и оксигруппу, частично разрушаются. В процессе аммонолиза разрушаются и некоторые другие аминокислоты, поэтому инкубация с аммиаком должна быть по возможности непродолжительной. Время, необходимое для этой реакции, подбирают, анализируя небольшие аликвоты образцов. Как правило, через 4 ч большая часть ДНФ- производных превращается в свободные аминокислоты.

3. Аммонолиз нельзя применять для количественных определений, но это очень хороший и быстрый метод качественного анализа.