Аминокислоты, пептиды и белки - Дэвени Т., Гергей Я. 1976
Анализ концевых групп и ступенчатая деградация белков и пептидов
Определение N-концевых групп 2,4-динитрофторбензольным методом
Приготовление ДНФ-аминокислот
При встряхивании смеси ДНФБ и аминокислот в спиртовом щелочном растворе образуются ДНФ-производные аминокислот.
МЕТОДИКА
10 ммолей аминокислоты растворяют или суспендируют в 40 мл воды и добавляют 2 г безводного Nа2СO3. Раствор нагревают до 40° С и добавляют 10 ммолей ДНФБ. Реакция заканчивается за 30— 50 мин, на что указывает полное растворение компонентов реакционной смеси. Смесь подкисляют, добавляя несколько капель концентрированной НСl. ДНФ-аминокислоты перекристаллизовывают из соответствующих растворителей (табл. 11).
Таблица 11 Растворители для перекристаллизации ДНФ-аминокислот
ДНФ- аминокислота |
Растворитель |
Ала, Цис, (Цис)2, Фен, Глу, Мет, Лей, иорВал, оксиПро, Про, Тре, Вал |
Эфир — петролейний эфир |
Асн, Гли, Глу, Сер |
Метанол — вода |
Apr, Гис |
Ацетон — вода |
Лиз, Тир, Три |
Ацетон — эфир |
ß-Ала |
Этанол — вода |
ПРИМЕЧАНИЯ
Некоторые аминокислоты при подкислении отделяются в виде маслообразного материала, который осаждается ацетоном. Полученную суспензию разводят ацетоном, обезвоживают безводным Na2SO4, отфильтровывают, большую часть ацетона упаривают, а ДНФ-аминокислоту осаждают бензолом и петролейним эфиром. Если материал еще имеет маслянистую консистенцию, всю процедуру повторяют. Осадок ДНФ-аминокислот перекристаллизовывают из соответствующего растворителя.