Аминокислоты, пептиды и белки - Дэвени Т., Гергей Я. 1976

Некоторые методологические вопросы аналитического исследования белков
Изучение нативных белков
Электрофорез нативных белков

При физиологических условиях общее содержание белка в сыворотке, а также А/Г-коэффициент варьируют в очень узких пределах. Отклонение от физиологическиой нормы указывает на наличие патологического процесса. Определение А/Г-коэффициента высаливанием все больше теряет свое значение, так как результат, полученный этим методом, — всего лишь грубый показатель количественных и качественных изменений множества сывороточных белков, выполняющих самые разнообразные функции. Содержание некоторых белковых фракций может увеличиваться или уменьшаться, они могут вовсе отсутствовать в сыворотке, но это в ряде случаев не отражается ни на общем содержании белка, ни на А/Г-коэффициенте.

Введение Тизелиусом электрофоретического анализа следует рассматривать как начало нового весьма значительного направления в изучении белков сыворотки.

Электростатический заряд белковых молекул в зависимости от pH среды может быть положительным или отрицательным, поэтому в электрическом поле молекулы движутся либо к аноду (анафорез), либо к катоду (катафорез). Это явление Тизелиус использовал для разделения отдельных компонентов смеси белков, в частности для изучения белковых фракций сыворотки крови.

При так называемом свободном электрофорезе (электрофорезе с подвижной границей), разработанном Тизелиусом, скорость и направление миграции разных белковых компонентов под влиянием электрического поля в U-образном сосуде, содержащем буферный раствор, целиком обусловлены зарядом их молекул. Скорость миграции частицы в электрическом поле определяется как расстояние, пройденное ею в единицу времени на единицу градиента напряжения. Следовательно, каждый из компонентов смеси белков можно выделить и охаратеризовать его скорость миграции.

Метод высаливания, как известно, позволяет разделить сыворотку на три фракции: альбумин, эуглобулин и псевдоглобулин. С введением электрофореза стало возможным выделять для повседневного клинического анализа по меньшей мере пять белковых фракций сыворотки: альбумин, а-1 -, a-2-, ß- и у-глобулины.

Здесь необходимо также упомянуть об ультрацентрифугировании, которое внесло весьма значительный вклад в современные представления о белках сыворотки. С введением цетрифугирования смеси белков в высокоскоростной центрифуге, впервые созданной Сведбергом, появилась возможность осаждать определенные белки и тем самым разделять смесь на компоненты, имеющие разную величину молекул. Этим методом можно определять гомогенность и молекулярный вес белков, а также выделять некоторые белки из смеси.

Электрофорез позволил установить нормальное процентное содержание белковых фракций сыворотки и выяснить значение его отклонений от нормы. Он обусловил появление таких клинически важных понятий, как диспротеинемия и парапротеинемия. Диспротеинемией называют нарушение относительного содержания встречающихся в норме белковых фракций сыворотки без появления “патологических” белков. Парапротеинемия означает появление в крови “патологических” белков.

Комбинированное применение методов Тизелиуса и Сведберга способствует выделению более однородных белковых фракций и позволяет получать более точные характеристики их молекулярных весов и скоростей миграции.