Аминокислоты, пептиды и белки - Дэвени Т., Гергей Я. 1976

Ионообменная хроматография в фиксированном слое ионообменника
Уравновешивание пластинок “Фиксион 50x8”

Для ионообменной хроматографии используется смола в соответствующей ионной форме. При колоночной хроматографии смолy сначала переводят из одной формы в другую (например, из Н⁺- в Nа⁺-форму), а потом колонку уравновешивают стартовым буферным раствором. При работе с пластинками “Фиксион 50 х 8” первой стадии, т.е. перевода из одной формы в другую, не требуется, так как слой готовят из особо чистой смолы, которая уже находится в Nа⁺-форме. Однако в некоторых случаях уравновешивание смолы необходимо, особенно при разработке новых методов. Оно осуществляется довольно просто — проточной хроматографией при непрерывной подаче буферного раствора. Пластинку “Фиксион 50 x 8” накладывают обратной стороной на стекло такого же размера. Складывают 4 листа фильтровальной бумаги (размером 20 х 15 см), с одного конца загибая полоску шириной 1 см, и прикладывают их к верхнему краю пластинки так, чтобы загнутая односантиметровая полоска бумаги покрыла слой ионнообменника; ее прикрепляют к пластинке резиновой обхваткой подходящего размера или двумя стеклянными палочками длиной 21 см, крепко связанными на концах (фиг. 48). Свободную часть листов бумаги отгибают на обратную сторону стекла. Листы бумаг должны быть шире пластинки, иначе при закреплении они могут собраться в складки, в результате неплотного прилегания нарушится равномерное поступление буферного раствора и процесс уравновешивания будет проходить плохо.

Для уравновешивания следует применять очень разбавленный буферный раствор, молярность которого на порядок ниже буферного раствора для хроматографии. Не рекомендуется применять буферный раствор с pH ниже 3, потому что при продолжительной хроматографии (16—24 ч) в таких условиях слой ионообменника может адсорбировать ионы тяжелых металлов, и тогда уравновешивание принесет больше вреда, чем пользы.

Фиг. 48. Уравновешивание пластинок “Фиксион”.

При уравновешивании обычно применяют цитратный буферный раствор, имеющий концентрацию Na⁺ 0,02 М и pH 3, используемый в 10-кратном разведении в качестве первого буферного раствора (А) в аминокислотном анализаторе. Во время уравновешивания пластинки нижняя часть слоя (погружаемая в буферный раствор) может расслоиться, сползти с подложки или полностью отделиться от нее. Поэтому при уравновешивании следует погружать конец пластинки не более чем на 1 см, а после высушивания целесообразно снимать с пластинки эту полоску слоя ионообменника.

Уравновешенные пластинки можно неограниченно долго хранить при комнатной температуре. Надо только следить за тем, чтобы они не адсорбировали пары аммиака. Чтобы исключить эту возможность, следует в частности запретить в лаборатории курение.