Аминокислоты, пептиды и белки - Дэвени Т., Гергей Я. 1976

Ионообменная хроматография в фиксированном слое ионообменника
Приготовление коллидин-нингидринового реагента

Раствор 1. 1 г нингидрина растворяют в смеси 100 мл ацетона и 10 мл ледяной уксусной кислоты.

Раствор 2. 1 г ацетата кадмия растворяют в 100 мл 50%-ного раствора уксусной кислоты.

Раствор 3. Коллидин.

ПРОЯВЛЕНИЕ

Для получения проявителя смешивают 10 мл раствора 1, 1 мл раствора 2 и 1 мл раствора 3. Проявлять пластинки можно тремя способами.

1. При быстрой идентификации и качественной оценке хорошо высушенную в потоке теплого воздуха пластинку осторожно и равномерно опрыскивают выбранным нингидриновым реагентом. После опрыскивания слой высушивают феном. В течение 2—3 мин развивается окрашивание и проявляются пятна.

Примечание. Этот способ не применим для денситометрической полуколичественной или количественной оценки, так как в результате локальных перегревов некоторые участки на пластинке “перепроявляются”. Если требуется полуколичественная или количественная оценка хроматограммы, надо выбрать один из двух следующих способов проявления:

2. Хроматограмму высушивают и опрыскивают, как описано в п. 1. После этого ацетон испаряют в потоке холодного воздуха, затем слой покрывают чистой и сухой стеклянной пластинкой и помещают в воздушный термостат при 45°С на 30 мин.

3. Когда проявляют при комнатной температуре, высушивание, проявление и испарение ацетона производят так же, как описано в п. 2. Накрытую стеклом хроматографическую пластинку оставляют на 8—16 ч в темном месте (в ящике или коробке). Чем ниже температура проявления, тем меньше окрасится фон; это имеет большое значение при количественном анализе, а также в тех случаях, когда количество исследуемого материала особенно мало (0,05—0,1 мкг).

Фон в первую очередь может окрашиваться в результате адсорбции паров аммиака, поэтому пластинки нельзя держать в атмосфере, загрязненной аммиаком и табачным дымом. Слой ионообменника занимает большую поверхность и может связывать аммиак даже из воздуха. Крайне важно для хроматографии применение свежеприготовленных растворов: при бактериальном проросте в них может образоваться значительное количество аммиака, который, загрязнит слой при уравновешивании и последующем разделении.

Хранение проявленных хроматограмм ничем не отличается от хранения обычных “классических” слоев (силикагель, целлюлоза). Готовую хроматограмму накрывают стеклянной пластинкой, обматывают обе пластинки склеивающей лентой и хранят несколько месяцев. С помощью копирующего аппарата хроматограммы можно непосредственно копировать для документации в размере оригинала.