Практическая химия белка - А. Дарбре 1989

Аффинная хроматография белков
Область применения аффинной хроматографии

На каком этапе общей схемы очистки следует использовать аффинную хроматографию? Различные возможности применения аффинной хроматографии в схематическом виде представлены на рис. 5.2.

Аффинная хроматография может быть использована на начальном этапе очистки при условии, что выделяемый белок настолько прочно и специфически взаимодействует с лигандом, что отделение его от сопутствующих примесей достигается в одну стадию. К таким примерам относится извлечение из сыворотки крови специфических антител с помощью иммобилизованных антигенов, извлечение гормонов из солюбилизированных плазматических мембран. Аффинная хроматография особенно эффективна в качестве начального этапа в том случае, если стабильность выделяемого вещества вызывает сомнение и необходимо по возможности сократить число стадий очистки. Причиной нестабильности может быть термолабильность белковой молекулы, чувствительность к действию протеаз, присутствующих в исходном экстракте, или необходимость сохранения специфического микроокружения — фосфолипидов или других веществ, ассоциированных с белком.

РИС. 5.1. Основные этапы аффинной хроматографии.

Часто аффинную хроматографию с успехом применяют на завершающем этапе выделения после частичной очистки с помощью менее специфических рутинных методов, например осаждения сульфатом аммония, гель-фильтрации и ионообменной хроматографии. Специфическое элюирование целевого продукта в этом случае может служить критерием его чистоты, а также тестом на сохранение биологической активности.

Аффинная хроматография может также использоваться в качестве промежуточной стадии выделения, однако при этом не ставится задача обеспечить полноту очистки.