Практическая химия белка - А. Дарбре 1989

Аналитические методы
Количественное определение белка
Метод атомно-абсорбционной спектрофотометрии

Метод позволяет определять белки в окрашенных или опалесцирующих растворах [92].

Реагент. 10 мл 0,20 М CuSO4 добавляют к 590 мл 0,167 М NaOH, содержащего 2 г тетрагидрата Nа2К-тартрата. Ионообменная смола AG2-X8.

Таблица 8.3. Определение количества белка по сравнению оптических плотностей при 280 и 260 им

A280/260

Нуклеиновая кислота, %

F

1,75

0,0

1,116

1,52

0,5

1,054

1,36

1,0

0,994

1,16

2,0

0,899

1,03

3,0

0,814

0,939

4,0

0,743

0,874

5,0

0,682

0,822

6,0

0,632

0,784

7,0

0,585

0,753

8,0

0,545

0,730

9,0

0,508

0,705

10,0

0,478

0,645

14,0

0,377

0,595

20,0

0,278

Атомно-абсорбционный спектрофотометр Varian-Techtron, модель 1000 с воздушно-ацетиленовым пламенем.

Методика. Приливают 1 мл Cu-реагента к 1 мл раствора белка (0,05—1,0 мг/мл). Смешивают. Через 2—5 мин добавляют 250 мг смолы и периодически встряхивают в течение 5 мин. После отстаивания смолы отбирают 1 мл супернатанта и добавляют к 3 мл дистиллированной воды. Определяют содержание меди на атомно-абсорбционном спектрофотометре при 324,8 нм. Готовят контрольный раствор реагентов и строят градуировочный график для БСА (0,05—1,0 мг/мл). Для уменьшения приборных шумов и предохранения прибора от блокировки в промежутках между измерениями образцов распыляют 0,5 мл ледяной уксусной кислоты. Присутствие хлорофилла, гема, рутения и других кофакторов не мешает определению. Метод привлекается, если неприменимы другие методы. Раствор белка должен содержать <0,4 М солей или аминокислот. Нерастворимые белки могут быть переведены в раствор с помощью 1% (масс./об.) ДСН.