Практическая химия белка - А. Дарбре 1989

Методы твердофазного анализа аминокислотной последовательности
Отщепление на твердофазном секвенаторе
Реакция карбамоилирования

На этой стадии чаще всего используется буфер № 1 [27]. Недавно предложен безводный буфер на основе ДМФА (содержащий 2,5% триэтиламина или N-метилморфолина) [43, 60]. В анализе с использованием ДАБИТЦ — ФИТЦ хорошие результаты дает использование буфера № 3 (рис. 12.5). Безводные или содержащие ДМФА буферы предпочтительнее предлагавшихся ранее водных (поскольку безводная среда создает гидрофобное окружение пептида, присоединенного к полимеру). Эти буферы применимы как для полимерных, так и для стеклянных носителей.

Используется 5%-ный раствор ФИТЦ в ацетонитриле; для работы одновременно с ДАБИТЦ и ФИТЦ оба реагента растворяют в ДМФА (рис. 12.5), так как ДАБИТЦ меньше гидролизуется в этом растворителе.

РИС. 12.5. Усовершенствованная программа для твердофазного анализа на микроуровне с использованием ДАБИТЦ — ФИТЦ. Обозначения: МеОН — метанол, содержащий 0,2% пропиламина; буфер — буфер № 3 для реакции карбамоилирования; ДАБИТЦ — 0,5%-ный раствор ДАБИТЦ в ДМФА; ФИТЦ — 5%-ный раствор ФИТЦ в ДМФА; ТФУ — безводная ТФУ [52].