Практическая химия белка - А. Дарбре 1989

Фрагментация полипептидной цепи ферментативными методами
Протеазы с высокой специфичностью

В этом разделе приведены сведения о ферментах, обладающих довольно узкой специфичностью, т. е. расщепляющих ограниченное число пептидных связей. Свойства этих ферментов представлены в табл. 3.1. Из ферментов этого типа наиболее важное значение имеет трипсин. Область применения трипсина может быть существенно расширена с помощью реакций модификации, рассмотренных в предыдущем разделе. Благодаря таким модификациям можно вести гидролиз либо по остаткам лизина, либо по остаткам аргинина. В настоящее время все более широкое применение находит протеаза V8 из S.aureus. При обработке этим ферментом прoисходит гидролиз пептидной связи остатков дикарбоновых кислот, главным образом глутаминовой кислоты, благодаря чему метод составляет серьезную конкуренцию расщеплению с помощью трипсина. Сравнительно недавно опубликованы данные о протеазе из мутанта Pseudomonas fragi [18]. Предварительные исследования свидетельствуют о том, что фермент гидролизует пептидную связь по аминогруппе остатков аспарагиновой или цистеиновой кислот. И хотя еще рано говорить о практическом применении этого фермента, вполне возможно, что он составит конкуренцию протеазе V8. Известны ферменты, специфичные в отношении остатков аргинина или лизина, однако они не нашли еще такого широкого применения, как трипсин. В целом эти ферменты расщепляют только часть предполагаемых пептидных связей, что в некоторых случаях является их несомненным преимуществом.