Практическая химия белка - А. Дарбре 1989

Фрагментация полипептидной цепи ферментативными методами
Протеазы с низкой специфичностью
Химотрипсин

В этом разделе приводятся сведения о важных в практическом отношении ферментах (свойства которых приведены в табл. 3.2), обладающих более широкой специфичностью. Охвачены далеко не все ферменты, однако рассмотрены большинство протеаз с широкой специфичностью. Многие из них гидролизуют пептидные связи, соседние с гидрофобными аминокислотными остатками. Рассмотрены также ферменты, такие, как пепсин и папаин, поскольку они часто используются с целью ограниченного протеолиза нативных белков.

Химотрипсин — один из наиболее специфичных ферментов, которые обсуждаются в этом разделе; он широко применяется для получения первичных гидролизатов [50, 56, 99].

Специфичность. Химотрипсин в основном гидролизует С-концевую пептидную связь ароматического или объемного гидрофобного остатка типа -Н-Х-, где X = Tyr, Phe, Тrр или Leu. Связи -Н-Рrо- устойчивы к действию фермента. Химотрипсин проявляет более широкую специфичность по сравнению с трипсином, так как может расщеплять пептидные связи других аминокислотных остатков, например Leu, His, Ile, Met, Ser и Val.

Условия гидролиза. Гидролиз проводят в условиях, аналогичных гидролизу трипсином: в 100 мМ NH₄HCO₃, соотношение фермент : субстрат = 1 : 50, 37 °С, 4 ч. Иногда используют буфер с pH 7,0, содержащий 2М гуанидин-НСl [101]. Химотрипсин является сериновой протеазой и ингибируется ДФФ и ФМСФ. Наличие примеси трипсина в препаратах химотрипсина встречается редко. При необходимости действие трипсина можно исключить, добавляя в реакционную смесь соевый ингибитор трипсина (разд. 3.5.1.1).