Практическая химия белка - А. Дарбре 1989

Фрагментация полипептидной цепи ферментативными методами
Протеазы с низкой специфичностью
Пепсин

Подробную информацию о каталитической активности и использовании пепсина можно найти в работах [11, 27]. Этот фермент — практически единственная широко изученная и доступная в виде коммерческого препарата кислая протеаза (наряду с протеазой V8 из 5. aureus).

3.6.3.1. Специфичность и условия гидролиза.

Специфичность. Пепсин специфичен главным образом к пептидным связям ароматических и объемных алифатических аминокислотных остатков. Связи, включающие глутаминовую кислоту, также чувствительны к действию фермента. К сожалению, пепсин характеризуется широкой специфичностью к ряду других пептидных связей, поэтому окончательный результат частичного гидролиза предсказать трудно. Фермент применяется с целью ограниченного протеолиза нативных белков. Так, например, обработка пепсином при pH 4,5—5,0 приводит к получению крупных фрагментов иммуноглобулинов [73].

Условия гидролиза. Пепсин проявляет активность в диапазоне pH 1-5 (оптимальные условия pH 2,0). Гидролиз проводят в 10 мМ НСl или 5%-ной уксусной кислоте. Фермент необратимо ингибируется при рН>6,0. Наиболее удачные результаты дает применение пепсина при определении положения дисульфидных связей, так как дисульфидный обмен минимален именно при низких pH; инкубация с пепсином приводит к получению коротких пептидов с правильно замкнутыми дисульфидными связями [101] (см. также разд. 4.4.2).