Гликопротеины - Хьюз Р. 1985

Строение
Определение последовательности

Только в редких случаях к полипептидному остову глнкопротеина прикрепляется лишь одна определенная углеводная цепь. Обычно гликозилируется несколько аминокислотных остатков, и к каждому из таких гликозилированных остатков может присоединяться несколько очень сходных гликанов. С помощью протеолиза можно отделить эти гликаны, прикрепленные к связующим аминокислотам или небольшим пептидам. Затем полученные гликопептиды разделяют и определяют их моносахаридный состав, причем часто удается установить полную последовательность углеводов [7] сочетанием различных химических, ферментативных и физических методов (табл. 2.2).

Таблица 2.2. Этапы определения последовательности сахаров гликанов

1.

Протеолиз: пролаза, трипсин, химотрипсин, коллагеназа и т. п.

2.

Разделение гликопептидов: гель-фильтрация, ионнообменная хроматография, электрофорез и хроматография на бумаге

3.

Состав: газово-жидкостная хроматография (моносахариды), ионообменная хроматография (аминокислоты)

4.

Определение последовательности сахаров:

а) химически: метилирование, окисление йодной кислотой

б) ферментативно: экзо- и эндогликозидазы

в) физически: масс-спектрометрия, ядерный магнитный резонанс

Рис. 2.3. Строение N-ацетилнейраминовой кислоти и других сиаловых кислот.

Название

Место замещения

Замещающая группа

Типичный источник

N-ацетилнейраминовая кислота

С-5

CH3CONH—

Обычный

N-гликолилнейраминовая кислота

С-5

HOCH3CONH—

Ткани свиньи (>90%)

О-ацетилпроизводные

С-9

С-7

СН3СО—

СР3СО—

Подчелюстная железа быка (редко)

С-4

СН3СО—

Ткани лошади

Идентификация таловых кислот, входящих в состав гликопротеинов, представляет собой особую проблему для анализа, поскольку основная кольцевая структура нейраминовой кислоты обнаруживается во многих вариантах, различающихся по положению замещающих групп. Наиболее часто встречающимся производным является N-ацетинейраминовая кислота (рис. 2.3); кроме того, известно еще около 20 других производных сиаловой кислоты. N-гликолилнейраминовая кислота, например, часто встречается в гликопротеинах или гликолипидах; известны также несколько О-ацильных производных этой и N-ацетилнейраминовой кислот. В образовании гликозидной связи принимает участие гидроксильная группа при С-2.