Основы биохимии Том 3 - А. Ленинджер 1985

Молекулярные механизмы передачи генетической информации
Еще о генах: репарация, мутации, рекомбинация и клонирование
Встраивание “нагруженных” плазмид в хромосому Е. coli

Теперь рекомбинантные плазмиды смешивают с клетками Е. coli для трансформации. Попасть в клетку и встроиться в хромосому Е. coli удается лишь нескольким плазмидам, однако эффективность проникновения плазмид можно повысить, добавляя ионы Са²⁺. Простейший путь для выявления клеток Е. coli, в которые попали новые гены, состоит в следующем. Клетки выращивают на твердой питательной среде, извлекают из каждой клеточной колонии ДНК и затем определяют, какая из колоний содержит ДНК, гибридизующуюся с радиоактивной кДНК, синтезированной на выделенной ранее мРНК. После этого выращивают колонию клеток Е. coli, содержащих рекомбинантную плазмиду, в ферментерах в больших объемах на свежей питательной среде, увеличивая число рекомбинантных плазмид в 10¹² и более раз.

Подобная рекомбинантная ДНК, несущая неродственные гены из двух разных видов организмов, называется химерной ДНК. В “Илиаде” Гомера Химерой называлось мифическое существо с головой льва, телом козы и хвостом змеи.

Рис. 30-22. Присоединение кДНК, содержащей роlу(А)-хвосты, к плазмиде, расщепленной рестриктирующей эндонуклеазой и снабженной poly (Т)-хвостами. Для большей наглядности масштаб изображенных на рисунке плазмиды и кДНК не отражает их истинных размеров. В действительности плазмида гораздо крупнее, чем кДНК одного гена.