Биохимия человека Том 2 - Марри Р. 1993

Структура, функция и репликация информационных макромолекул
Технология рекомбинантных ДНК
Словарь-справочник

Бактериофаг. Вирус, инфицирующий бактерии. Библиотека. Коллекция клонированных фрагментов, представляющих какой-либо геном. Различают геномные библиотеки (включают последовательности и интронов, и экзонов) и кДНК-библиотеки (только экзоны).

Вектор. Плазмида или бактериофаг, в которые может быть введена чужеродная ДНК с целью клонирования.

Вестерн-блоттинг. Метод переноса белков на нитроцеллюлозный фильтр с последующей идентификацией интересующего исследователя белка с помощью соответствующего зонда (например, антител). Вставка. Дополнительный фрагмент ДНК, который вводят в исходную молекулу методами генной инженерии.

Зонд (проба). Молекула, используемая для выявления специфических фрагментов ДНК, РНК или белка при блот-анализе. (Например, при скрининге геномных библиотек). Зондами могут служить молекулы кДНК, синтетические олигонуклеотиды или специфические антитела.

Интрон. Участок последовательности гена, который транскрибируется, но удаляется из структуры мРНК-предшественника до начала трансляции (не входит в состав зрелой мРНК). кДНК. Одноцепочечная молекула ДНК, комплементарная мРНК и синтезируемая на ней как на матрице с помощью обратной транскриптазы.

Клон. Большое число клеток (или молекул), полностью идентичных исходной родительской клетке (или молекуле).

Космида. Плазмида, в которую введен специфический сайт фага X (cos-сайт), необходимый для упаковки in vitro плазмидной ДНК.

Лигирование. Катализируемое ферментом соединение (сшивка) двух фрагментов ДНК или РНК в один путем образования фосфодиэфирной связи. Соответствующие ферменты называются ДНК-(или РНК)-лигазами.

Липкие концы ДНК. Комплементарные одноцепочечные участки ДНК, выступающие на противоположных концах двухцепочечной молекулы. Ник-трансляция. Метод введения метки в ДНК; основан на том, что ДНК-полимераза Escherichia coli способна осуществлять деградацию одной из цепей ДНК, в которой до этого был сделан разрез («ник»), и тут же строить новую цепь, используя неповрежденную в качестве матрицы. Если в реакционную смесь ввести меченые нуклеозидтрифосфаты, то вновь образуемая цепь окажется радиоактивной, что дает возможность ее использования в качестве зонда.

Нозерн-блоттинг. Метод переноса РНК из агарозного геля на нитроцеллюлозный фильтр, на котором положение определенной молекулы РНК выявляют с помощью гибридизации с радиоактивным зондом. Обратная транскрипция. РНК-зависимый синтез ДНК, катализируемый обратной транскриптазой. Палиндром. Участок двухцепочечной ДНК, в которой последовательность одной из цепей идентична последовательности другой цепи, прочитанной в обратном направлении.

Плазмида. Небольшая экстрахромосомная кольцевая молекула ДНК, реплицирующаяся независимо от хромосомы хозяина.

Псевдоген. Функционально неактивный участок ДНК, возникший в результате мутаций в родительском гене.

Радиоавтография. Выявление радиоактивно меченных молекул (ДНК, РНК или белков), основанное на их способности воздействовать на фотопленку. Рекомбинантная ДНК. Молекула ДНК со встроенным участком чужеродной ДНК.

Рестриктаза. Эндонуклеаза, расщепляющая обе цепи ДНК в строго определенных сайтах со специфической последовательностью оснований. Саузерн-блоттинг. Метод переноса фрагментов ДНК из агарозного геля на нитроцеллюлозный фильтр с последующей гибридизацией с меченым зондом. Сигнал. Конечный этап визуализации определенного фрагмента ДНК (клона). Например, при радиоавтографии — темное пятно на рентгеновской пленке, соответствующее месту нахождения гибридного дуплекса, одна из цепей которого является радиоактивно меченным зондом.

Сплайсинг. Завершающий этап процессинга РНК — соединение экзонов с образованием зрелой мРНК. Тандем. Множество копий одной и той же последовательности, соединенных в протяженную линейную молекулу.

Терминальная трансфераза. Фермент, присоединяющий нуклеотиды одного типа к 3'-концам молекулы ДНК.

Трансгенный организм. Организм, развившийся из зародышевой клетки, в ядро которой с помощью инъекции была введена чужеродная ДНК. Трансляция. мРНК-зависимый синтез белка. Транскрипция. ДНК-зависимый синтез РНК.

Тупые концы ДНК. Концы двухцепочечной ДНК, не имеющие выступающих одноцепочечных 3'- или 5'-участков.

Химерная молекула. Молекула (ДНК, РНК, белок), состоящая из фрагментов, которые имеют разное происхождение.

Шпилька. Двухцепочечная область (элемент вторичной структуры), образованная за счет спаривания оснований соседних комплементарных участков последовательности, которые расположены в одной и той же цепи ДНК или РНК.

Экзон. Кодирующая часть последовательности гена; представлена в зрелой мРНК.

Экзонуклеаза. Фермент, отщепляющий нуклеотиды с 3'- или 5'-конца молекулы ДНК или РНК. Эндонуклеаза. Фермент, расщепляющий фосфодиэфирные связи во внутренних областях цепей ДНК или РНК.

Литература

Beaudet A. L. Bibliography of cloned human and other selected DNAs, Am. J. Hum. Genet., 1985, 37, 386.

DNA in medicine, Lancet, 1984, 2, 853, 908, 966, 1022, 1086, 1138, 1194, 1257, 1329, 1380, 1440.

Gusella J. F. Recombinant DNA techniques in the diagnosis and treatment of inherited disorders, J. Clin. Invest., 1986, 77, 1723.

Kan Y. W. et al. Pages 275—283. In: Thalassemia: Recent Advances in Detection and Treatment, Cao A., Carcassi U., Rowley P. (eds.), AR Liss, 1982.

Lewin В. Genes II, Wiley, 1985.

Maniatis T., Fritsch E. F., Sambrook J. Molecular Cloning, 2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory, 1983.

Martin J. B., Gusella J. F. Huntington’s disease: Pathogenesis and management, N. Engl. J. Med., 1986, 315, 1267.

Maxam A. M., Sequencing the DNA of recombinant chromosomes, Fed. Proc., 1980, 39, 2830.

Orkin S. H. et al. Improved detection of the sickle mutation by DNA analysis: Application to prenatal diagnosis, N. Engl. J. Med., 1982, 307, 32.

Watson J. D., Tooze J., Kurtz D. T. Recombinant DNA: A short Couse, Freeman, 1983.

Weatherall D. J. The New Genetics and Clinical Practice, 2nd ed., Oxford Univ. Press, 1986.

Yuan R. Structure and mechanism of multifunctional restriction endonucleases, Annu. Rev. Biochem., 1981, 50, 285.