Химия белка. Структура, свойства, методы исследования - Шендрик А.Н. 2022

Методы экспериментального исследования структуры белков
Электронная микроскопия
Подготовка и “окрашивание” образцов - Оттенение

Другой прием увеличения контрастности изображения сводится к покрытию поверхности образца слоем атомов тяжелого металла. Суть его состоит в том, что на поверхность образца под небольшим углом напыляется в вакууме тонкий слой металла. Производят напыление в вакуумной камере (см. рис. 4.15) нагреванием спирали достаточно удаленной от образца. Контрастность достигается тем, что атомы конденсируются на поверхности в соответствии с ее рельефом. В затененных областях толщина слоя металла меньше, на открытых участках - больше (см. рис. 4.16). Высота объекта связана с длинной отбрасываемой им тени соотношением: h = dtga, что позволяет получать на микрофотографиях объемные очертания исследуемых образцов и оценивать их геометрические размеры.

Рис.4.15 Вакуумная камера для напыления металлической пленки на образец по методу оттенения 1 - спираль; 2 - пары металла, 3 - камера; 4 - образец; 5 - платформа; 6 - основание; 7 - электроды

Рис. 4.16 Схема напыления пленки металла на образец и образования области тени при контрастировании по методу оттенения

На рис. 4.17, в качестве иллюстрации, приведена полученная методом оттенения микрофотография бактериофага Т4 E. Coli.

Рис. 4. 17 Электронная микрофотография бактериофага Т4 E.coli. Метод контрастирования - оттенение. Направление тени обозначено стрелкой

Для получения представлений о трехмерной структуре образца напыление проводят при различных углах наклона образца (а) по отношению к потоку атомов металла.