Химия белка. Структура, свойства, методы исследования - Шендрик А.Н. 2022

Методы экспериментального исследования структуры белков
Методы разделения белков
Экспериментальные методы электрофореза - Диск-электрофорез

Этот вид электрофореза является разновидностью гель-электрофореза. Он выполняется в градиентах рН среды, концентрации геля и величины напряжения. Принципиальная схема диск-электрофореза и прибора для его проведения приведены на рис. 4.6; 4.7).

Рис. 4.6 Принципиальная схема диск-электрофореза в стеклянной трубке

Гель находится в вертикальной колонке из стекла и разделен на три области. Верхняя область -это область образца или стартовый гель, средняя - прокладка или концентрирующий гель, нижняя - разделяющий гель. Стартовый и концентрирующий гели имеют больший размер пор, чем разделяющий и готовятся в буферном растворе с низкой ионной силой и меньшим значением рН.

Меньшая ионная сила обеспечивает большее электрическое сопротивление, поэтому градиент электрического потенциала в верхней части колонки больше.

Рис 4.7 Принципиальная схема прибора для диск-электрофореза.

1 - крышка; 2 - анализируемый образец; 3 - стартовый гель (гель-прокладка); разделяющий гель; 5 - верхний сосуд; 6 - буфер; 7 - нижний сосуд; 8 - стеклянная трубка.

Большие поры и градиент потенциала вверху колонки позволяют быстро продвигаться образцу через ее верхние слои. В результате на границе между прокладкой и разделяющим слоем происходит концентрирование образца. В нижнем геле из-за большей ионной силы, большей величины рН и меньшего размера пор создается эффект молекулярного сита. Проходя через него молекулы одного вида образуют более узкие и лучше разрешенные зоны, чем при обычном гель-электрофорезе (см рисунок).

После электрофореза и прокрашивания геля проявляются зоны для отдельных компонентов, различающихся подвижностью - Q/r (зоны 1-6)