БІОТЕХНОЛОГІЯ - Іншина Н.М. - 2009

РОЗДІЛ 3. КЛІТИННА ІНЖЕНЕРІЯ

Культури тваринних клітин. Історія методу

Широке застосування культури клітин людини і тварин розпочалося з праць, в яких була продемонстрована можливість вирощування вірусів в клітинній культурі (1949 р.). З цією метою використано клітини нирок людського ембріона, нирок дорослих мавп, ембріонів курчат. Застосування методу клітинних культур дозволило одержати віруси в необхідній кількості. Це сприяло розвитку методів діагностики вірусних захворювань й отриманню необхідних вакцин.

Можна виділити такі етапи в історії методу культури тваринних клітин:

1) наприкінці XIX ст. - на початку XX ст. було встановлено, що клітини тканин тварин можна виділити з організму і створити умови для їх росту і відтворення in vitro;

2) встановлена можливість вирощування і розмноження вірусів у тваринних клітинах;

3) обґрунтована можливість одержання в клітинах тварин вірусного матеріалу для виготовлення вакцин; можливість вбудовування генів у клітини; можливість вирощування в культурі з однієї клітини цілої популяції.

Основні дати історії методу культури тваринних клітин

1885 р. - Ру встановив можливість збереження живих тканин поза організмом, у своїх дослідженнях він показав, що оболонка ембріона курчат може зберігатися у теплому фізіологічному розчині.

1897 р. — Леб підтримував у життєздатному стані клітини крові і сполучної тканини у пробірках із сироваткою і плазмою крові.

1898 р. - Льюнгрен показав можливість підтримки в життєздатному стані експлантатів шкіри людини, при цьому зберігалася їх здатність до реімплантації.

1904 - 1907 рр. - Гаррісон здійснив дослідження, в яких експериментально довів можливість вирощування ізольованих клітин in vitro; учений виростив нейробласти жаби в лімфатичній рідині і встановив, що швидкість росту нервових клітин становить 20 мкм за 25 хв.

1911 р. - зоологи Каррель і Барроуз культивували тканини і клітини ссавців.

1928 р. — для спостереження за культурою клітин Канті розробив метод кінофотомікрофотографії.

1948 р. - Ерл уперше одержав клони клітин у культурі.

1952 р. - Джей виділив клітинну лінію карциноми шийки матки

1961 р. — Хейфлік і Мурхед виділили лінію диплоїдних клітин людини і показали, що її період існування в культурі становить приблизно 50 подвоєнь популяції.

Надалі успіхи в розробці культури тваринних клітин і тканин зумовлено створенням і вдосконаленням синтетичних поживних середовищ.

У технології культивування клітин тварин і людини використовуються такі методики:

- методики одержання клітин, що не містять бактерій і грибів;

- методики розробки середовищ, в яких відбувається ріст ізольованих клітин;

- методики спостереження за клітинами в динаміці їх розвитку;

- методики безперервного культивування клітин in vitro.

Установлено, що диплоїдні клітини людини генетично стабільні, вільні від латентних й онкогенних вірусів. Тому лінії диплоїдних клітин людини дозволяють використовувати для одержання цінних речовин. Але новітні дослідження засвідчили, що клітини містять потенційно небезпечні онкогени, які можуть індукувати утворення пухлин.