Молекулярная биология. Практическое руководство - Великов В.А. 2013

Введение

В учебно-методическое пособие для практикума по молекулярной биологии включены описания и протоколы стандартных методов исследования, особое внимание при этом уделено методам молекулярного клонирования. Приведены наиболее распространённые и общепринятые методики, не требующие дорогостоящих или редких реактивов и материалов либо коммерческих наборов реагентов. Работы распределены по отдельным темам, выбор конкретной работы зависит от направления подготовки или специальности студента.

Каждая работа содержит теоретическое описание и краткую характеристику метода, наиболее важные аспекты его практического использования, целевое назначение необходимых реактивов и оборудования, подробное постадийное описание лабораторных операций. Все подобранные для практикума бактериальные штаммы, рекомбинантные конструкции, векторы и гены являются безопасными, распространёнными и доступными.

Работы в практикуме расположены в определённой логической последовательности, хотя и построены на разном фактическом материале. Как правило, сначала необходимо выделить общую ДНК из клеток интересующего организма, затем приготовить векторную ДНК для клонирования нужного гена, потом проанализировать полученную ДНК методом электрофореза, провести её обработку рестриктазами, осуществить процедуру клонирования гена в клетках бактерий-продуцентов и, наконец, выделить из клеток рекомбинантный белок. Целевой белок впоследствии необходимо проанализировать методом электрофореза, определить его концентрацию и при необходимости дополнительно очистить. С помощью метода ПЦР можно осуществлять клонирование гена или скрининг плазмид, содержащих рекомбинантную ДНК. Расчёты в работе с белками помогут в решении конкретных задач, стоящих перед исследователем. Справочные сведения и наглядный материал представлены в приложениях.

При подготовке учебно-методического пособия использовались частично материалы из следующих источников: Sambrook J., Russel D. Molecular cloning: a laboratory manual, 3nd ed. (v.1), Cold Spring Harbor Lab. Press, Cold Spring Harbor, NY, 2001; Глик Б., Пастернак Дж. Молекулярная биотехнология. Принципы и примененение. М.: Мир, 2002; Генная инженерия растений: Лаб. рук-во / Пер. с англ. Под ред. Дж. Дрейпера и др. М.: Мир, 1991; Великов В.А., Кузнецов П.Е. Практикум по молекулярной биологии. Методы биоинженерии / Под ред. В.В. Игнатова. Саратов: Изд-во Сарат. ун-та, 2006; материалы интернет-ресурсов «MOLBIOL.RU - Классическая и молекулярная биология» (http://www.molbiol.ru), «Практическая молекулярная биология» (http://www.molbiol.edu.ru), «National Center for Biotechnology Information» (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/ pubmed.com).