Аминокислоты, пептиды и белки - Дэвени Т., Гергей Я. 1976

Анализ концевых групп и ступенчатая деградация белков и пептидов
Определение последовательности аминкислот в пептидах деградацией по Эдману и количественным аминокислотным анализом
Идентификация и определение ФТГ-производных

При ступенчатой деградации пептидов для расшифровки последовательности достаточно определить аминокислотный состав пептида, остающегося после каждого очередного отщепления. Предположим, пептид имеет состав А, В, С, D, Е. Если мы после каждой ступени ФТЦ-деградации проведем определение состава укороченного пептида, то получим следующие результаты:

Из полученных данных очевидно, что пептид имеет последовательность B-C-A-D-E.

Однако этот метод целесообразно использовать лишь тогда, когда аминокислотный анализ можно провести достаточно точно и быстро.

ФТГ-производные идентифицируют и определяют хроматографией на бумаге либо непосредственно, либо после их разрушения.

ПРЯМАЯ ИДЕНТИФИКАЦИЯ

Фильтровальную бумагу Ватман 1 смачивают крахмальным раствором и высушивают на воздухе. Для хроматографии используют три смеси растворителей: гептан—пиридин (7 : 3); гептан— бутанол—муравьиная кислота (4:4: 2); гептан—бутанол—муравьиная кислота (4 : 2 : 4), верхняя фаза.

Восходящая хроматография длится 5—8 ч. Пятна проявляют, опрыскивая бумагу свежеприготовленным иодазидным реактивом: ФТГ-производные дают белые пятна на коричневом фоне.

Примечания. Пятна, получаемые при хроматографии, не имеют четких границ, для них характерны большие “хвосты”, образующиеся в результате адсорбции. Проявление пятен не совсем удовлетворительное: специфичность его недостаточна, к тому же пятна быстро исчезают и поэтому промежуток времени, когда можно оценить хроматограмму, очень невелик. Бледные пятна не имеют четких границ.

НЕПРЯМАЯ ИДЕНТИФИКАЦИЯ [6]

ФТГ-производные разрушают в 6 н. НСl при 150°С (16 ч). Нейтрализованные препараты хроматографируют в бутанольной системе так же, как и свободные аминокислоты.

Примечание. ФТГ-производные Сер, Тре, Цис и Про разрушаются полностью; из ФТГ-Три образуется Гли.