Аминокислоты, пептиды и белки - Дэвени Т., Гергей Я. 1976

Анализ концевых групп и ступенчатая деградация белков и пептидов
Определение последовательности аминкислот в пептидах деградацией по Эдману и количественным аминокислотным анализом
Приготовление ФТГ-аминокислот

0,3 ммоля аминокислоты и такое же количество Na₂CО₃ растворяют в 3 мл дистиллированной воды и добавляют 3 мл диоксана, очищенного от перекисей. Затем к смеси приливают 0,1 мл ФТЦ и инкубируют при комнатной температуре 2,5—3 ч. После инкубации для удаления избытка ФТЦ смесь экстрагируют несколько раз сначала циклогексаном, а затем бензолом. Следы бензола удаляют продуванием воздуха, после чего к раствору добавляют НСl до концентрации 1 М, необходимой для циклизации. Смесь перемешивается при комнатной температуре 3—4 ч, и большинство ФТГ-производных начинает кристаллизоваться. Если кристаллизация не начинается, раствор медленно концентрируют, высушивая под вакуумом. Перекристаллизацию ведут из соответствующего растворителя (табл. 12).

Таблица 12 Растворители, используемые для перекристаллизации фенилтиогидантоиновых производных

ПРИМЕЧАНИЯ

Циклизация является критическим этапом реакции назависимо от того, идет ли реакция с аминокислотой, с пептидом или с белком. Спектры поглощения ФТК-производного и циклизованного ФТГ- производного имеют различные максимумы: 270 и 240 нм соответственно. Поэтому за процессом циклизации можно следить спектрофотометрически при 240 нм: реакция заканчивается, когда перестает изменяться экстинкция при этой длине волны. Если циклизация идет слишком медленно, процесс можно ускорить, увеличив концентрацию кислоты или осторожно нагревая смесь. Однако нужно помнить, что существуют устойчивые пептидные связи, циклизация которых идет очень медленно или не идет вообще.