Аминокислоты, пептиды и белки - Дэвени Т., Гергей Я. 1976

Методы иммунохимического анализа
Анализ белков с помощью реакции преципитации
Определение зоны эквивалентности реакции антиген-антитело

Принцип метода. Определяют те количества антигена и иммунной сыворотки, которые без остатка вступают в реакцию преципитации после их перемешивания, так что надосадочная жидкость после отделения осадка не содержит ни антигена, ни антител.

Область применения. Предварительное определение зоны эквивалентности необходимо для постановки количественной реакции преципитации (см. стр. 125) и иммуноэлектрофореза (см. стр. 137).

МЕТОДИКА

Готовят серию двукратных разведений раствора антигена известной концентрации (см. стр. 121). 0,1 мл раствора антигена каждого разведения смешивают с 0,5 мл иммунной сыворотки. В зависимости от активности антисыворотку можно применять либо неразведенной, либо в разведении 1 : 2 или 1 : 4. Смесь инкубируют 60 мин при 37°С и оставляют до следующего дня в холодильнике. Образовавшийся преципитат осаждают центрифугированием при 1500 об/мин 10 мин и в надосадочной жидкости определяют оставшийся антиген или антитела, как описано на стр. 120. Проба, в которой надосадочная жидкость не содержит ни антигена, ни антител, позволяет обнаружить зону эквивалентности.

Для более точного выявления зоны эквивалентности следует надосадочную жидкость из пробирок, расположенных рядом с той, которая указывает на зону эквивалентности, дополнительно исследовать с более дробными разведениями антигена.