Аминокислоты, пептиды и белки - Дэвени Т., Гергей Я. 1976

Методы иммунохимического анализа
Анализ белков методами диффузии в геле
Иммунная гель-фильтрация

Принцип метода. Метод представляет собой комбинацию фракционирования исследуемого белка при помощи тонкослойной гель- фильтрации с иммунодиффузионным анализом в геле.

Область применения. Получение таких характеристик исследуемых белков, которые определяются размером их молекул и серологическими свойствами.

МЕТОДИКА

1. Тонкослойная гель-фильтрация. На стеклянную пластинку размером 8 х 20 см наносят слой сефадекса G-100 или G-200 в 0,05 М вероналовом буферном растворе pH 8,4 так, чтобы высота слоя была 0,5 мм (см. стр. 231).

Затем пластинку закрепляют под нужным углом в буферном резервуаре, заполненном 0,02 М трис-НСl pH 8,0, содержащим 0,2 М NaCl. Методика уравновешивания сефадекса и нанесения образца описаны на стр. 231. Сначала наносят на пластинку 1—2 мкл исследуемого образца и контрольные растворы, затем проводят гель-фильтрацию, пластинку извлекают из прибора и помещают на горизонтальную поверхность.

2. Иммунодиффузия. На участке между зонами разделения исследуемого образца и контрольных веществ гель сефадекса удаляют (фиг. 32). Всю поверхность пластинки заливают слоем расплавленного 1%-ного агара толщиной 1 мм. После его затвердения между зонами исследуемого образца и контрольных соединений вырезают продольную канавку, которую заполняют специфической иммунной сывороткой. Пластинку помещают во влажную камеру и образовавшиеся полосы преципитации фотографируют в нативном состоянии или после окрашивания (фиг. 32).

Фиг. 32. Схема иммуногель-фильтрации (объяснение см. в тексте).

ПРИМЕЧАНИЯ

Основное преимущество этого метода заключается в том, что, исследуя очень малые количества белка, можно охарактеризовать его иммунологические свойства и размер молекул.