Аминокислоты, пептиды и белки - Дэвени Т., Гергей Я. 1976

Гидролиз белков и пептидов
Гидролиз белков и пептидов папаином

Принцип метода. Папаин, не обладающий выраженной специфичностью, гидролизует белки и пептиды до мелких фрагментов.

Область применения. Структурный анализ белков и пептидов.

МЕТОДИКА

1. Активация папаина. 10 мг имеющегося в продаже папаина растворяют в 1 мл 1%-ного NaCl и выдерживают при 37°С в течение 1 ч. Сразу же после такой обработки фермент готов для использования.

2. Папаиновый гидролиз. К 1%-ному раствору гидролизуемого субстрата (белка) прибавляют папаин до конечной концентрации 0,02% и 1,0 н. NaOH подводят pH до 7,0. Смесь инкубируют в автотитраторе при комнатной температуре в атмосфере азота, медленно перемешивая на магнитной мешалке в течение 20—24 ч. Реакцию останавливают кипячением, реакционную смесь фильтруют и лиофилизируют.

ПРИМЕЧАНИЕ

Папаин — не специфический фермент, он расщепляет различные пептидные связи, например такие, как Глу-Глн, Цис SО₃H-Cep, Глн-Лей, Глу-Асн ит. д.