Аминокислоты, пептиды и белки - Дэвени Т., Гергей Я. 1976

Гидролиз белков и пептидов
Расщепление белков бромцианом

Принцип метода. В кислой среде бромциан специфически расщепляет полипептидные цепи белков по метиониновым остаткам с образованием гомосеринлактона (иодацетамид взаимодействует с белками подобно бромциану). Реакция протекает по следующей схеме:

Область применения. Расщепление белков на относительно крупные полипептиды при их структурном исследовании.

МЕТОДИКА    

Исследуемый белок растворяют или суспендируют в 0,1 н. НСl, прибавляют 30-кратный избыток бромциана, инкубируют в вытяжном шкафу с перемешиванием в течение 24 ч и затем реакционную смесь лиофилизируют.

ПРИМЕЧАНИЕ

Для успешного анализа весьма важно выбрать подходящий метод фракционирования и очистки крупных полипептидных фрагментов, появившихся в результате действия бромциана на белок. Вначале удобно провести предварительное фракционирование по размеру молекул с помощью гель-фильтрации, а затем применить ионообменную хроматографию на колонке ДЭАЭ- или КМ-целлюлозы, лучше в присутствии мочевины.

Рекомендуемая литература

Boyer Р. D., The Enzymes, Vol. Ill, Academic Press, New York, London, 1971.

Colowick S. P., Kaplan N. О., eds., Methods in Enzymology, Vol. XXV, Academic Press, New York, London, 1972.

Hill R. L., Adv. Protein Chem., 20, 37 (1965).

Kasper С. B., in: Needleman S. P. ed., Protein Sequence Determination, p. 137—165, Springer Verlag, Berlin—Heidelberg, New York, 1970.

Witkop В., Adv. Protein Chem., 16, 221 (1961).