Аминокислоты, пептиды и белки - Дэвени Т., Гергей Я. 1976

Тонкослойная хроматография (Д. А. Медьеши)
Тонкослойная хроматография аминокислот и их производных
Пептиды

Ряд авторов с успехом использовали хроматографию в тонком слое для анализа ферментативных гидролизатов белков [3, 7, 16, 17]. Двумерной хроматографией можно получить пептидные карты в системах: хлороформ — метанол — 25%-ный NH₄OH (2:2:1) и пиридин — уксусная кислота — бутанол — вода (40 : 14 : 68 : 25) (двукратная хроматография).

В качестве носителя рекомендуется использовать силикагель марки кизельгель S (фирма Macherey-Nagel, ФРГ). Перед опытом слой силикагеля в течение 30 мин прогревают при 110° С и после первого разделения прогревание повторяют. Чаще всего тонкослойную хроматографию комбинируют с электрофорезом.

Обычно пептидная карта может быть получена за 5—10 ч. Ричард [14], анализируя триптический гидролизат миозина хроматографией в тонком слое силикагеля (кизельгель G), на первом этапе использовал горизонтальную продолжительную хроматографию в смеси хлороформ — метанол — 34%-ный NH₄OH (2 : 2 : 1). На втором этапе разделения был проведен электрофорез в смеси пиридин — уксусная кислота — вода (1 : 10 : 489) в течение 1 ч при напряжении 980 В. Бальё и др. [3] проанализировали триптический гидролизат восстановленного и алкилированного IgG человека с помощью хроматографии в тонком слое силикагеля марки кизель-гель G (фирма Merck, ФРГ), содержащего 0,5% амилопектина. Слой носителя после приготовления хроматографической пластинки был высушен на воздухе. До опыта пластинки хранили в эксикаторе, а затем использовали их без прогревания. На первом этапе разделения была применена продолжительная проточная хроматография в смеси пропанол — этанол — концентрированный аммиак — вода (20 : 60 : 2 : 20) в течение 7—8 ч. После этого пластинку подсушивали при 60°С и подвергали электрофорезу в том же буферном растворе, который использовал Ричард [14], в течение 50 мин при напряжении 1000 В.