Аминокислоты, пептиды и белки - Дэвени Т., Гергей Я. 1976

Анализ концевых групп и ступенчатая деградация белков и пептидов
Определение N-концевых групп 2,4-динитрофторбензольным методом
Динитрофенилирование белков

Белок обрабатывается ДНФБ в слабощелочной среде при комнатной температуре.

МЕТОДИКА

1 г белка растворяют или суспендируют в 10 мл 10%-ного раствора NaHCО₃ и добавляют 2 объема 5%-ного раствора ДНФБ в этаноле. Реакционную смесь встряхивают в темноте при комнатной температуре в течение 4—72 ч. Продолжительность инкубации зависит от растворимости и реакционноспособности исследуемого белка. Если реакция идет в гетерогенной фазе, т. е. динитрофенилируют малорастворимое вещество, то лучше увеличить время инкубации и сравнить результаты, получаемые при динитрофенилировании в течение 24, 48 и 72 ч. Однако если реакция идет в гомогенной фазе, т. е. динитрофенилируют растворимый в бикарбонате белок или белок не выпадает в осадок после добавления спиртового раствора ДНФБ (или образуется лишь небольшой осадок), то реакция заканчивается за 2—4 ч. По окончании реакции раствор или суспензию подкисляют несколькими каплями 0,6 н. НСl. Осадок отделяют центрифугированием и промывают сначала смесью этанол— эфир (1 : 1) и затем эфиром. ДНФ-белок хранят в темном месте в вакуумном эксикаторе.