Практическая химия белка - А. Дарбре 1989

Разделение смесей белков и пептидов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
Ионный обмен

Разработка ионообменных носителей, пригодных для ВЭЖХ, началась с работ отдельных исследователей и фирм, главным образом фирмы Pharmacia [17, 18].

В настоящее время известно четыре типа носителей:

1. Гликофазы — стеклянные частицы, с пленкой эпоксиполимера на поверхности, ковалентно связанного с силанольными группами стекла глицерилпропильными связями. Поставляются в виде диэтиламиноэтильных, карбоксиметильных и сульфопропильных производных, а также в виде четвертичных аммониевых производных под названием CPG-гликофазы.

2. Пелликулярные сорбенты содержат в боковых цепях остатки ДЭАЭ. Поставляются фирмами в виде колонок Synchropak (Synchrom Incorp.).

3. Ионообменные сорбенты фирмы Toyo Soda (Япония) представляют собой носители для гель-хроматографии, модифицированные для проведения ионообменных процессов.

4. Носители для СЖХБ (Pharmacia, Швеция).

Эти ионообменники можно использовать для проведения быстрых разделений, по назначению сходных с теми, которые проводятся на обычных мягких гелях. Носители для СЖХБ применяли для разделения сложных смесей [17].

Детально испытывались анионообменные колонки, в частности Synchropak АХ-300. При нагрузке 10 мг белка на колонку размером 4,1x250 мм при скорости потока 0,5 мл/мин и градиенте концентрации ацетата натрия (0—0,5 моль/л) в трис-буфере (pH 8) в течение 90 мин выход различных ферментов составлял 90—100% [29].

Несомненно, в ближайшие годы будут продолжаться интенсивные исследования свойств сорбентов такого типа и можно ожидать, что быстрые ионообменные разделения станут общепринятыми. В настоящее время метод СЖХБ предпочтителен для высокоэффективного ионообменного разделения фракций, полученных при помощи ВЭЖХ.