Практическая химия белка - А. Дарбре 1989

Аналитические методы
Обнаружение соединений при хроматографии на бумаге и в тонком слое сорбента
Флуоресцентные методы обнаружения

После высушивания хроматограмму просматривают в УФ-свете для обнаружения флуоресцирующих пятен. Обычно также видна линия фронта растворителей, по ее форме можно проконтролировать нарушение потока в хроматографической системе.

Ниже приводимые методики используются для проявления хроматограммы погружением в раствор реагента или опрыскиванием в соответствующих условиях.

1. Погружают лист бумаги в раствор флуорескамина в ацетоне (25 мг в 1 л, содержащем 0,5% триэтиламина). Исследуют в УФ-свете, чувствительность обнаружения 1 нмоль пептида. В препаративном опыте применяют менее концентрированный раствор флуорескамина (4 мг/л). После промывки ацетоном могут быть применены другие типы окрашивания.

2. Необходимы: раствор флуорескамина (10 мг/100 мл ацетона) и раствор триэтиламина (1%-ный в ацетоне). Хроматограмму высушивают, для удаления растворителя промывают ацетоном и вновь сушат. Опрыскивают раствором триэтиламина и после сушки в вытяжном шкафу (15 мин) раствором флуорескамина. Высушивают, опрыскивают ацетоном, снова сушат. Отмечают флуоресцирующие пятна под УФ-лампой (336 нм). Для обнаружения слабо проявившихся пятен пептидов процедуру обработки повторяют еще раз. При нагревании хроматограммы в термостате при 110 °С в течение 3 ч могут быть обнаружены пептиды с N-концевым остатком пролина [131].

3. Необходимы: раствор о-фталевого альдегида (30 мг/100 мл ацетона) и раствор триэтиламина (1%-ный в ацетоне, содержит 0,05% 2-меркаптоэтанола). Процедура обработки хроматограммы этим реагентом аналогична описанной в пункте 2. По чувствительности ОФА не уступает флуорескамину, но дешевле его.