Практическая химия белка - А. Дарбре 1989

Методы твердофазного анализа аминокислотной последовательности
Материалы
Растворы реагентов и буферов для секвенатора

Следует использовать реагенты и растворители, очищенные, как изложено выше.

Буфер № 1 для реакции конденсации: пиридин — N-метилморфолин — трифтороуксусная кислота. 28 мл N-метилморфолина растворяют в 190 мл воды, добавляют 3,75 мл ТФУ, доводят водой до объема 200 мл: pH полученного раствора 8,1. К этому буферу добавляют пиридин в соотношении (2:3), после чего pH конечного раствора 7,9. Следует использовать свежеприготовленный буфер, хранить под азотом.

Буфер № 2 для реакции конденсации (безводный): ДМФА — триэтиламин. К 97,5 мл ДМФА добавить 2,5 мл триэтиламина.

Буфер № 3 для реакции конденсации (при анализе на макроуровне с использованием ДАБИТЦ — ФИТЦ): пиридин — N-этил морфолин — трифтороуксусная кислота — ДМФА. В 22,5 мл воды под азотом растворить 4,5 мл N-этилморфолина. Добавить несколько капель ТФУ, затем воду до объема 30 мл (pH полученного раствора 9,1). К 10 мл этого буфера добавить 20 мл ДМФА и 20 мл пиридина, дегазировать. Хранить под азотом.

Раствор метилизотиоционата (МИТЦ) в ацетонитриле. Растворить 1 г МИТЦ в 1 мл ацетонитрила.

Раствор фенилизотиоционата (ФИТЦ): 10%-ный раствор ФИТЦ в ацетонитриле. К 50 мл ацетонитрила добавить под азотом 5 мл ФИТЦ.

Раствор ФИТЦ № 2 (для анализа на микроуровне с ДАБИТЦ — ФИТЦ): 5%-ный ФИТЦ в ДМФА. К 19 мл ДМФА под азотом добавить 1 мл ФИТЦ.

Раствор ДАБИТЦ (для анализа на микроуровне): 0,5%-ный ДАБИТЦ в ДМФА. К 20 мл ДМФА под азотом добавить 100 мг ДАБИТЦ. Готовить свежий раствор каждые 24 ч.

Растворитель для анализа на макроуровне: 0,2%-ный триэтиламин в метаноле. К 500 мл метанола под азотом добавить 1 мл триэтиламина.