Практическая химия белка - А. Дарбре 1989

Фрагментация полипептидов химическими методами
Частичный кислотный гидролиз
Расщепление связи Asp-Pro

Пептидная связь Asp-Pro особенно лабильна в условиях мягкого кислотного гидролиза [58, 73, 97, 108]. Избирательное расщепление может идти в кислой среде при гидролизе пепсином, при обработке белка раствором бромоциана в 70%-ной муравьиной кислоте или в процессе очистки пептидов гель- фильтрацией в водной уксусной или муравьиной кислоте. Частичный гидролиз связи Asp-Pro наблюдался, в частности, при обработке глутаматдeгидрогeназы бромоцианом в 70%- ной муравьиной кислоте [140]; в этой же работе обсуждается вероятный механизм кислотного гидролиза пептидной связи Asp-Pro.

К сожалению, связь Asp-Pro встречается в белках достаточно редко; тем не менее этот прием полезен, поскольку позволяет получать относительно крупные фрагменты, удобные для автоматического секвенирования.

2.3.1.1. Методика [130]. S-Пиридилэтилпроизводное (полученное по реакции с 4-винилпиридином) у-цепи фетального гемоглобина (51 мг) растворяют в 2 мл 70%-ной муравьиной кислоты, содержащей 7 М гуанидин-HCl, и инкубируют при 40 °С в течение 24 ч. Затем в реакционную смесь добавляют 2 мл охлажденной деионизированной воды и незамедлительно хроматографируют в 9%-пой уксусной кислоте на колонке (2X95 см) с сефадексом G-75 (супермелкий). C-Концевой фрагмент (остатки 100—146) получают после лиофильного высушивания соответствующих фракций и вторичного хроматографирования на колонке (2X95 см) с сефадексом G-50 (супермелкий) также в 9%-ной муравьиной кислоте.