БІОТЕХНОЛОГІЯ - В. Г. Герасименко - 2006

Частина ІІ. Спеціальні біотехнології

Розділ 16. ДНК-ВАКЦИНИ

16.1. СТРУКТУРА

Конструктивно під ДНК-вакциною мають на увазі плазмідну ДНК (кільцеву ковалентно-замкнену молекулу довжиною від 4 до 6 тис. пар нуклеотидів), в яку вбудовані гени, що кодують найбільш важливі для імуногенності білки вибраного патогену і які експресують ці білки під контролем еукаріотичного промотору (ділянки ДНК, відповідальної за зв’язування РНК-полімерази, що ініціює транскрипцію). При конструюванні молекули ДНК-вакцини частіше використовують ранній промотор цитомегаловірусуЮ вірусу саркоми Рауса, вірусу мавп (SV40), аденоасоційованого вірусу (AAV), α-глобіну, β-актину, дигідрофолактредуктази, а також сигнали поліадеііулюшіння SV40 або гормону росту ВРХ. Як селекційний маркер, необхідний для реплікації рекомбінантної дазміди в Е. соlі,. до конструкції включають ген резистентності до антибіотиків (ампіциліну. рідше канампіпну).

Реплікація власне плазмідної ДНК відбувається тільки в бактеріальних клітинах (Е. coli), тоді як транскрипція гена специфічного протективного білка (вставки) - в клітинах ссавців.

На сьогодні розроблені і більш ефективні системи, які здатні реалізовувати експресію не тільки окремих генів антигенів, а і їх сполучення (Feltquate D. M., 1998), або, включивши додатково до конструкції гени термінальних повторів аденоасоційованого вірусу, інтегрувати молекулу ДНК-вакцини до хромосоми клітини (Deryabina O. et al, 2003), рис. 16.1.

Рис. 16.1. Схема рекомбінантної плазміди ВКЧС-pTR-UFneo-:

TR - кінцевий повтор аденоасоційованого вірусу (AAV), PCMV - промоторна область цитомегаловірусу, SD/SA - донор/акцептор сплайсингу, E2 CSFV - ген білка Е2 вірусу класичної чуми свиней, pA₁ - сигнал поліаденілювання, pA₂- сигнал поліаденілювання, neo - ген резистентності до неоміцину (селективний маркер), Amp - ген резистентності до ампіциліну

(селективний маркер)