Аминокислоты, пептиды и белки - Дэвени Т., Гергей Я. 1976

Газохроматографический анализ производных аминокислот. Состояние проблемы. Возможности и ограничения метода
Принцип метода

Для ГХ-анализа, разумеется, прежде всего необходим газовый хроматограф. Ниже дано описание этого прибора, подробное настолько, насколько это необходимо с точки зрения анализа производных аминокислот. Принцип работы прибора иллюстрирует фиг. 65. Прибор состоит из источника газа-носителя и различных измерительных и контрольных приборов, с помощью которых поддерживается постоянный поток газа. Газ-носитель, прежде чем попасть в колонку, проходит через дозатор, куда вводится 0,05—5,0 мг анализируемого вещества; здесь вещество испаряется и переносится газом-носителем в колонку (или капилляр). В колонке происходит разделение по принципу различного удельного давления паров компонентов и их различной растворимости в разделяющей жидкости. Различные скорости миграции компонентов обусловлены также различными коэффициентами распределения между газовой жидкой фазами. В силу всех этих причин время миграции компонентов через колонку различно. Длина набивной колонки чаще всего равна 2 или даже 10 м, а длина капилляров — 5—100 м.

Фиг. 65. Схематическое изображение газового хроматографа.

1 — резервуар с газом (чистым электролитическим Н₂, чистым N₂, не содержащим кислорода, или чистым Не); 2 — манометр; 3, 4 — измерительная и сравнительная линия потока газаносителя соответственно; 5 — дозатор; 6 — колонка; 7 — детектор; 8 — электронная система для регистрации сигналов детектора (усилитель); 9 — милливольтметр с самописцем; 10 — хроматограмма.

В конце разделяющей колонки газ-носитель вместе с разделенный ми компонентами, которые все уже находятся в газовой фазе, попадает в детектор. Этот прибор дает измеряемый электрический сигнал, зависящий от концентрации вещества и регистрируемый самопишущим милливольтметром. В результате получают график изменения концентрации компонентов со временем (т. е. хроматограмму), на котором пики располагаются над базовой линией, соответствующей нулевой концентрации. Положение пиков можно охарактеризовать полным временем удерживания вещества, т. е. промежутком времени от момента нанесения образца до появления пика на самописце. Из этих данных можно вычислить действительное время удерживания и, исходя из параллельных сравнительных измерений, индекс удерживания, который характерен для данного изучаемого вещества.

Площадь под пиками отражает количество вещества, и это позволяет вычислить количественный состав смеси. Используя разные разделяющие жидкости и различную температуру и сравнивай время удерживания исследуемых и уже известных веществ, добавляемых к образцу, можно проводить качественный анализ. Если, например, в образце предполагается наличие производного Ала, то на хроматограмме должен появляться соответствующий пик в определенном предполагаемом месте. Производное Ала, добавленное к образцу, должно давать пик, который будет накладываться на пик изучаемого вещества. С помощью определенных реакций, при которых происходят превращения производного Ала, соответствующий пик на хроматограмме может быть удален или смещен. Некоторые другие приемы, которые здесь не обсуждаются, также помогают; идентифицировать компоненты.