Аминокислоты, пептиды и белки - Дэвени Т., Гергей Я. 1976

Ионообменная хроматография пептидов
Фракционирование пептидов на колонке в дауэксом 50х2 в летучих растворах

Принцип метода. Ионообменная хроматография проводится в летучих буферных растворах, что позволяет избежать специальных стадий обессоливания фракций.

Область применения. Препаративное фракционирование пептидов, микроструктурный анализ белков и полипептидов.

МЕТОДИКА

1. Подготовка колонки. Смолу дауэкс 50 х 2 переводят в Н⁺-форму и в течение 1 ч перемешивают в 0,2 М пиридинформиатном буферном растворе pH 3,1. Затем смолу загружают в колонку и промывают тем же самым буферным раствором, до тех пор пока pH вытекающего раствора не станет 3,1.

2. Приготовление буферных растворов. Для приготовления буферного раствора pH 3,1 смешивают 16 мл пиридина, 32 мл муравьиной кислоты и 950 мл дистиллированной воды.

Для приготовления буферного раствора pH 5,1 смешивают 158 мл пиридина и 110 мл уксусной кислоты и добавляют к смеси дистиллированную воду до конечного объема 1 л.

3. Нанесение препарата. Около 100 мг фракционируемого материала растворяют в 5 мл 0,2 М муравьиной кислоты и наносят на колонку.

4. Хроматография. С помощью автоматического коллектора собирают фракции по 2 мл. Элюирование начинают буферным раствором pH 5,1, а после 150-й фракции начинают градиентное элюирование. В смеситель заливают 500 мл буферного раствора pH 3,1, а в резервуар — буферный раствор pH 5,1.

Из каждой фракции отбирают по 0,2 мл элюата, проводят щелочной гидролиз и затем ставят нингидриновую реакцию (см. стр. 199).