Аминокислоты, пептиды и белки - Дэвени Т., Гергей Я. 1976

Гель-фильтрация белков и пептидов
Разделение белков непрерывно повторяющейся гель-фильтрацией

Принцип метода. Фракционируемый материал пропускают через одну и ту же колонку несколько раз; это позволяет разделить даже те компоненты смеси, которые не делятся на колонке обычной длины.

Область применения. Выделение и очистка белков.

МЕТОДИКА

1. Оборудование. Комплект приборов, выпускаемых фирмой LKB (Швеция) для непрерывно повторяющейся хроматографии под названием “Рецихром” (фиг. 42), состоит из следующих основных частей: хроматографическая колонка, перистальтический насос и проточный абсорбциометр.

2. Хроматография. Исследуемый материал наносят на колонку с сефадексом, выбранным в соответствии с молекулярным весом разделяемых веществ. Поток элюента, как показано на фиг. 42, устанавливают в нужном направлении соответствующим поворотом двухходового распределительного крана. Для подачи элюента на колонку снизу вверх в систему включен перистальтический насос. С помощью этой системы можно повторно пропускать фракционируемый образец через колонку. Оптическая плотность фракций непрерывно регистрируется самописцем. В процессе разделения белков при соответствующих поворотах распределительного крана сначала из препарата удаляют примесные (нежелательные) фракции, а затем выделяют совершенно гомогенную белковую фракцию (фиг. 43). В комплект входят колонки размером 3,2x105 и 3,2х65 см. С помощью перистальтического насоса можно устанавливать скорость протекания раствора от самой малой до 80 мл/ч.

Фиг. 42. Схема работы системы “Рецихром”.

1 — хроматографическая колонка; 2 — охлаждающая рубашка; 3 — полиэтиленовый тонкостенный капиллярный шланг; 4 — проточная кювета абсорбциометра; 5 — самописец; 6 — двухходовой распределительный кран; 7 — перистальтический микроиасос; 8 — воронка для заполнения колонки с соединительной муфтой.

Фиг. 43. Очистка компонента В церулоплазмина с помощью системы “Рецихром”.

Сб — сброс нежелательных примесей; Э — элюирование нужного компонента.

Рекомендуемая литература

Determan Н., Gel Chromatography, Springer Verlag, Berlin, Heidelberg, New York, 1968. (Г. Детермаи, Гель-хроматография, изд-во “Мир”, М., 1970.)

Leach S. I., Physical Principles and Techniques of Protein Chemistry, Academic Press, New York, London, 1969.

Williams C. A., Chase M. W., Methods in Immunology and Immunochemistry Vol. II, Academic Press, New York, London, 1968.