Практическая химия белка - А. Дарбре 1989

Фрагментация полипептидов химическими методами
Другие методы химического расщепления пептидных связей
Расщепление связи Asn-Gly

Свойство гидроксиламина специфически расщеплять пептидную связь фрагмента Asn-Gly (81) успешно используется на практике при структурных исследованиях белков и крупных пептидов. Метод основан на способности боковой цепи остатка аспарагина циклизоваться с образованием замещенного сукцинимида (82), который затем подвергается нуклеофильной

атаке со стороны гидроксиламина [13]. Повышенная лабильность связи Asn-Gly по сравнению с другими связями Asn-X, по-видимому, обусловлена относительной легкостью циклизации при отсутствии пространственных ограничений со стороны боковой группы ближайшего аминокислотного остатка (глицина). Известно, что некоторые эфиры глутаминовой кислоты в пептидах также образуют циклические соединения, однако расщепления связи Gln-Gly под действием гидроксиламина не наблюдается.

Методика расщепления гидроксиламином описана в работе [и]. Более поздние публикации посвящены в основном различным модификациям этой методики, включающей повышение концентрации гидроксиламина, проведение реакции при несколько повышенной температуре, более низком pH, использование в качестве растворителя 6 М гуанидин-HCl и гидроксида лития для установления pH среды.

2.8.1.1. Методика [44]. 102 мг легкой цепи фактора X₁(в виде S-пиридил-этилпроизводного) растворяют при 20 °С в 25 мл 6 М гуанидин-HCl, содержащего 2% солянокислого гидроксиламина, и подтитровывают 4,5 М LiOH до pH 9,0. В ходе реакции pH поддерживают с помощью 4,5 М LiOH. Оптимальное время проведения реакции составляет 4 ч.