Химия белка. Структура, свойства, методы исследования - Шендрик А.Н. 2022

Методы экспериментального исследования структуры белков
Методы разделения белков
Экспериментальные методы электрофореза - Фронтальный электрофорез

Метод фронтального ЭФ (его называют еще методом движущейся границы) создал Тизелиус, разработав специальную кювету. Суть метода в следующем. В U-образную прозрачную ячейку помещают раствор белка. Поверх раствора осторожно наслаивают чистый буфер. Затем при постоянной температуре и в условиях, исключающих вибрацию, на систему накладывают электрическое поле.

При перемещении белка под действием поля из раствора в зону чистого буфера создается граница, которая движется в направлении одного из электродов (в зависимости от заряда белковой молекулы). На этой границе наблюдается резкое изменение показателя преломления. Оно обусловлено тем, что показатели преломления чистого буфера и раствора белка в буфере различны. На основании данных измерений градиента показателя преломления вдоль ячейки при помощи специального оптического метода, называемого шлирен-методом строят электрофореграмму (см. рис.)

Каждый пик на электрофореграмме соответствует положению движущейся границы определенного белка. С максимумом концентрации белка он не совпадает.

В последнее время вариант электрофореза по Тизелиусу практически не используется. Его заменили более совершенные и более удобные методики.