Химия белка. Структура, свойства, методы исследования - Шендрик А.Н. 2022

Методы экспериментального исследования структуры белков
Методы разделения белков
Экспериментальные методы электрофореза - Изотахофорез

В этом методе заряженные частицы разделяются вначале по их зарядам и подвижности, а затем перемещаются в электрическом поле с одинаковыми скоростями.

При проведении эксперимента проба вводится между ведущим и замыкающим электролитами. Ведущий электролит содержит ион с большей подвижностью, чем у ионов пробы. Замыкающий имеет ион с меньшей подвижностью, чем у ионов пробы. Ионы ведущего, замыкающего электролитов и пробы должны иметь один и тот же противоион.

Ведущие ионы движутся к аноду быстрее, чем частицы пробы. В результате образуется некоторый градиент суммарной концентрации ионов, и, как следствие, градиент напряженности электрического поля (из-за изменения сопротивления раствора). Это приводит к увеличению скорости движения ионов пробы. Последние, однако, не могут проникнуть в зону ведущих ионов, поскольку напряженность электрического поля в этой области меньше и движение ионов пробы в ней замедляется. Таким образом формируется самостабилизирующаяся граница между ведущими ионами и ионами пробы.

По той же причине замыкающие ионы не могут опередить ионы пробы, т.к. последние являются фактически ведущими для замыкающих ионов. Кроме того, поскольку сами ионы пробы имеют различную электрофоретическую подвижность, они распределяются между собой таким же образом на ведущие и замыкающие. В результате этого компоненты анализируемой смеси разобьются на отдельные зоны, которые в конечном итоге будут двигаться друг за другом с одной и той же скоростью.

Если к пробе добавить амфолиты, то они, располагаясь между отдельными компонентами (зонами) смеси, обеспечат более отчетливое обособление зон.

Такие добавки называют “спейсерными” (разделяющими, раздвигающими). Они фактически выполняют роль “прокладок” между отдельными компонентами смеси.

Изотахофорез проводят, как правило, в ПААГ. По разрешающей способности изотахофорез приближается к ИЭФ.